细胞结合测定技术解析：2025最新实验流程与数据分析

细胞结合测定 将2×10^5个靶细胞接种在V形96孔板的每个孔中，并通过500 x g离心5分钟（室温）用200 μL PBS洗涤两次。随后，细胞在100 μL ThermoFisher Scientific的Live/Dead固定绿色标记缓冲液中于暗处孵育15分钟。洗涤两次后，用200 μL PBS再次洗涤细胞，然后在室温下用含10%山羊血清的50 μL BD染色缓冲液（BD Biosciences）孵育20分钟。之后，加入含有适当量T细胞接合剂的50 μL BD染色缓冲液。在4°C暗处孵育60分钟后，用200 μL PBS洗涤细胞两次。然后，用100 μL BD染色缓冲液与山羊抗人IgG-Alexa Fluor 647抗体（最终浓度：2.5 μg/mL）对细胞进行染色。再次用200 μL PBS洗涤两次后，使用iQUE Screener分析细胞。数据使用FlowJo进行分析，具体的门控策略为：首先，通过前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）选择靶细胞群体。从靶细胞群体中，通过FSC-A和FSC-H选择单细胞。通过低活/死绿色染料选择活的单细胞。在FlowJo中获取表达靶标的平均荧光强度（MFI）。结合EC50值使用FlowJo中的MFI生成，并在GraphPad Prism中使用单点特异性结合非线性Logistic回归进行分析。