EGFR BiTE1介导的细胞毒性定量评估与机制解析

图 S2. 定量评估旁观者杀伤效应时，EGFR 阴性和阳性细胞群体的计数。(A) 未经处理的 EGFR 阳性/阴性混合培养物在 48 小时时使用 EGFR 抗体染色的代表性图像，显示了接种时的 EGFR 阳性比例（蓝色 = 核染色；绿色 = EGFR，比例尺 = 30 μm）。(B) 用于分析图 3 的人群分布和荧光门控策略。虚线表示 EGFR 荧光的阈值。(C) EGFR 阳性的 NUGC4 细胞和 EGFR 阴性的 SW620 细胞以不同比例混合，并与 T 细胞（E:T 比例 10:1）及 0、1.2 或 11 pM EGFR BiTE1 共孵育 48 小时，如图 3 所述进行分析（左图：EGFR 阳性；右图：EGFR 阴性，N = 4，均值 ± 标准差）。(D) 荧光素酶标记的 EGFR 阴性 AML 细胞（MOLM13-LUC）与未标记的 EGFR 阳性 NUGC4 细胞（1:1）混合，并在与 T 细胞（E:T 10:1）及 EGFR BiTE1、阴性对照 MEC14 BiTE1 或阳性对照 CD33 BiTE1 共孵育 48 小时后通过发光法（Steady-Glo1, Promega）测量细胞毒性（N = 3，均值 ± 标准差）。(TIF) 图 S3. HCT116 细胞表达 EGFR 并对 EGFR BiTE1 介导的细胞毒性敏感。(A) HCT116 细胞与 EGFR BiTE1 和 T 细胞（E:T 10:1）共孵育 48 小时，通过细胞成像核计数测量细胞毒性（N = 4，均值 ± 标准差）。(B) 使用抗 EGFR 抗体（ThermoFisher）对活 HCT116 细胞进行染色，以确认 EGFR 表面表达。(TIF)