T细胞衍生细胞因子增强EGFR阴性细胞对旁观者杀伤的敏感性

T细胞衍生的细胞因子使EGFR阴性细胞对旁观者杀伤敏感 为了探讨旁观者杀伤的机制，评估了激活的T细胞释放的因素的影响。当与T细胞和EGFR BiTE1共孵育时，T细胞被激活并分泌多种促炎因子（图2和3，表S1，[18]）。含有培养基和T细胞的粗提上清液，而不是从这些培养物中去除的无细胞培养基，在转移到EGFR阴性细胞时诱导显著的细胞毒性（图5A；图S4A和S4B）。如预期的那样，当EGFR阴性细胞直接用T细胞加EGFR BiTE1处理时，未观察到细胞毒性（图5A；图S4C）。这些结果在Transwell1实验中得到了证实，其中EGFR阳性细胞、T细胞和EGFR BiTE1被放置在上室，而EGFR阴性细胞被放置在下室；室间由限制细胞但不限制可溶性因子通过的膜分隔。T细胞可以通过5 μm的膜，但不能通过1 μm的膜，并且在BiTE1激活后具有更高的迁移能力（图S4D）。只有当膜孔径足够大，允许T细胞通过时，下室中的EGFR阴性细胞才会被杀死（图5B）。因此，靠近TAA阴性细胞的BiTE1激活的T细胞，而不是可溶性因子，介导了旁观者杀伤。 IFNγ和TNFα由BiTE1激活的T细胞高水平产生（图2，[28-30]），但含T细胞产生的细胞因子的澄清上清液对SW620细胞没有直接的细胞毒性。同样，外源添加的重组IFNγ和TNFα，单独或联合使用，即使在浓度超过BiTE1激活的T细胞产生的浓度时，对本研究中使用的细胞系也没有细胞毒性（图S4E）。然而，在存在EGFR阳性细胞的情况下，由EGFR BiTE1激活的T细胞（即BiTE1激活的T细胞）裂解了EGFR阴性细胞。当EGFR阴性细胞预先用IFNγ和TNFα处理时，裂解程度显著增加（图5C）。这些数据表明，这些细胞因子虽然本身没有直接的细胞毒性，但作用于EGFR阴性细胞，增加了它们对BiTE1激活的T细胞裂解的敏感性。