T细胞介导的ROR1+肿瘤细胞杀伤作用研究

所有四种构建体均表现出相似的T细胞介导的ROR1+肿瘤细胞杀伤作用（图3A）。与基于2A2的构建体相比，它们都显示出增强的T细胞介导的细胞毒性，Emax值约为80%。然而，我们在IFNγ释放方面观察到了显著差异。VHH-2-Fab显示最高的IFNγ释放水平，其次是VHH-2-LC和VHH-2-串联。VHH-2-Hc几乎不释放IFNγ，我们推测这不足以支持肿瘤炎症和下游内源性抗肿瘤免疫（6, 49）。解耦比（相对于基准归一化）在2.4到11.9之间变化（图3B）。中间的VHH-2-LC和VHH-2-串联解耦比代表了进一步优化TCEs的首选起点，因为它们类似于标准的第二代解耦TCEs，具有明显但较小的“细胞因子窗口”（17, 20），定义为达到最大杀伤剂量范围内的细胞因子释放可以从非常低（为了安全性）调至接近第一代TCEs诱导的水平。正如在anti-ROR1 scFv格式中所见，在第二个VHH远离CD3结合部分的情况下，解耦能力增加，这与我们上述发现一致。接下来，选择了VHH-2-LC进行细胞因子窗口的优化，因为它表现出更好的生物物理特性（数据未显示）。