Par3与OGDH直接结合验证：GST pulldown与全长蛋白实验差异解析

该研究在天然条件下并未显示全长Par3与全长OGDH之间的直接结合。尽管基于片段的GST pulldown实验（图2K）和界面突变实验（图2L–2O）支持直接接触，但共免疫沉淀实验（图2E–2F）和PLA实验（图2D）不能排除桥接蛋白的存在，而且片段可能结合非生理表面。文献中未见对PARD3-OGDH相互作用的先前表征[1][2]，也没有研究采用严格的生物物理验证方法来研究类似的极性蛋白-代谢酶相互作用。在没有使用全长蛋白质的生物物理结合数据或在完整线粒体中的交联数据的情况下，直接的天然相互作用仍然是推断而非证实。