IFN-γ释放检测方法详解

IFN-γ释放检测 使用人IFN-γ ELISA检测试剂盒测量细胞毒性试验中IFN-γ的释放。简要步骤如下：按照试剂盒制造商提供的说明书，将试剂盒提供的包被抗体稀释至推荐浓度。将100 μL稀释后的包被抗体加入Nunc MaxiSorp平底96孔板中，封板后在4°C孵育过夜。然后用洗涤缓冲液洗涤平板4次。为了封闭非特异性结合并减少背景信号，加入200 μL Assay Diluent A，在室温下于摇床（400 rpm）上孵育1小时。封闭后，再次用洗涤缓冲液洗涤平板4次。随后，将100 μL/孔的标准品（用培养基配制）或样品加入指定孔中，在室温下于摇床（400 rpm）上孵育2小时。与样品或标准品孵育2小时后，用洗涤缓冲液洗涤平板4次，加入100 μL稀释后的检测抗体溶液，在室温下于摇床（400 rpm）上孵育1小时。然后用洗涤缓冲液洗涤平板4次，加入100 μL稀释后的链霉亲和素-HRP溶液，在室温下于摇床（400 rpm）上孵育30分钟。与链霉亲和素-HRP孵育30分钟后，用洗涤缓冲液洗涤平板5次，加入100 μL新配制的TMB底物溶液，在室温下避光孵育20分钟。最后，加入100 μL终止液终止反应。使用酶标仪在450 nm处测量吸光度，并通过不同浓度标准品生成的标准曲线计算每个样品中IFN-γ的浓度。