连续杀伤实验：靶细胞处理与稀释技术详解

连续杀伤实验 在实验前一天，从靶细胞中移除选择性抗生素。在实验当天，通过短暂的TrypLE处理收集靶细胞系，然后在室温下以500 × g离心5分钟，用培养基洗涤。随后，将靶细胞系重悬于培养基中，使用Cellometer通过台盼蓝排斥法测定细胞活力。调整活细胞密度至200,000个细胞/mL。然后，以2为稀释因子，从200,000个细胞/mL稀释至3,125个细胞/mL（200,000个细胞/mL、100,000个细胞/mL、50,000个细胞/mL、25,000个细胞/mL、12,500个细胞/mL、6,250个细胞/mL、3,125个细胞/mL、0个细胞/mL）制备靶细胞的系列稀释液。使用多通道移液器将不同密度的50 μL靶细胞悬浮液小心地分配到96孔黑色透明平底细胞培养板的标准对照孔中，每孔分别含有10,000个细胞、5,000个细胞、2,500个细胞、1,250个细胞、625个细胞、313个细胞、156个细胞、0个细胞作为标准对照。对于所有测试样品孔，将100 μL密度为50,000个细胞/mL的靶细胞悬浮液（每孔5,000个细胞）小心地分配到指定孔中。将含有靶细胞的培养板在37°C下孵育4小时。