EGFR BiTE® 在 T 细胞活化与靶细胞裂解中的作用

结果 EGFR BiTE® 在 EGFR 表达细胞存在下诱导 T 细胞活化、细胞因子释放、FASL 表达及靶细胞裂解 在我们的研究中，使用了 EGFR 阳性和阴性的人类胃肠道癌细胞系，以及一种 EGFR/CD3 双特异性 BiTE1 抗体构建物 [18]。通过 RNA 测序（表 1）和活细胞流式细胞术（S1 图）测定，NUGC4 细胞表达中等水平的 EGFR mRNA，而 SW620 细胞则未检测到 EGFR mRNA 和细胞表面蛋白。 在使用 EGFR 阳性的 NUGC4 细胞和纯化的人 T 细胞的实验中，EGFR BiTE1 激活的 T 细胞介导了高度有效的重定向裂解，EC50 值在 1 到 10 pM 的 EGFR BiTE1 抗体之间。裂解依赖于 BiTE1 浓度和效应 T 细胞与靶细胞的比例（E:T 比）（图 2A）。相比之下，即使在最高 BiTE1 浓度为 100 pM 和最高 E:T 比为 8:1 的情况下，EGFR 阴性的 SW620 细胞也不易被 BiTE1 介导的 T 细胞杀伤（图 2B）。一种对照 BiTE1 抗体构建物 MEC14，针对一个无关抗原但使用相同的 CD3 结合结构域 [23]，也不会介导 NUGC4 或 SW620 细胞的裂解（图 2A 和 2B）。BiTE1 介导的细胞毒性的依赖性在文献中已有详细记录 [24–27]，并且非常可重复。T 细胞活化（图 2C）、包括 IFNγ（图 2D）、TNFα（图 2E）和 FAS 配体（图 2F）在内的促炎介质分泌仅在 T 细胞遇到 EGFR 阳性的 NUGC4 细胞时才明显，而不是 EGFR 阴性的 SW620 细胞。同样，当 T 细胞与 EGFR 阳性细胞结合时，IL-1β、IL-6 和颗粒酶 B 的分泌也随着 EGFR BiTE1 浓度的增加而增加（S1 表）。这些结果表明，EGFR BiTE1 介导的细胞毒性和 T 细胞活化需要 TAA 表达细胞的存在。