Par3-OGDH相互作用定位难题：如何通过基质限制性co-IP验证线粒体结合？

Par3–OGDH 相互作用发生的亚细胞区室尚未通过分馏限制的实验直接证明。尽管共定位（图 2C）和邻位连接分析（PLA）（图 2D，图 S2A）表明该相互作用可能靠近线粒体，但这些方法并不能确定结合是在线粒体内还是在混合的细胞裂解物中发生的。共免疫沉淀（co-IP）实验（图 2E–2F）似乎是从全细胞提取物中进行的，这无法排除胞质或非基质区域的相互作用。这一担忧得到了证据的支持，即 OGDH 类似蛋白可以表现出意外的亚细胞定位，包括核定位而非线粒体定位 [1]。基质限制的 co-IP 或蛋白酶保护的线粒体 co-IP 可以解决这一问题。