T细胞活化与细胞毒性测定技术解析

激活抗体。使用不含叠氮化物的小鼠抗人FAS激活（IgM）单克隆抗体（克隆CH11，Millipore），浓度为2.5 μg/ml。 T细胞 泛T细胞购自AllCells。未在实验前刺激的T细胞称为静息T细胞。活化的T细胞通过两种方法生成：(1) 对于体内研究，使用包被有抗CD2、抗CD28和抗CD3抗体的磁珠按照制造商的说明（Miltenyi Biotec T细胞活化/扩增试剂盒）培养3-7天生成活化的T细胞；(2) 对于体外实验，BiTE1活化的T细胞通过将泛T细胞与NUGC4细胞（比例10:1）及100 pM EGFR BiTE1共培养24小时生成。在用于实验前，T细胞用新鲜培养基洗涤。使用抗CD25和抗CD69抗体（BD）确认活化状态。 T细胞依赖性细胞毒性（TDCC）测定