人外周血单个核细胞分离方法详解

材料与方法 人外周血单个核细胞分离 从健康供者的全血中使用Ficoll-Paque Plus介质分离PBMCs（外周血单个核细胞）。具体步骤如下：将35 mL稀释后的全血（全血与PBS体积比为1:1）轻轻覆盖在50 mL离心管底部的15 mL Ficoll-Paque Plus介质上，注意不要破坏界面。在室温下以400 × g的速度离心40分钟，不使用刹车。收集白细胞层（Ficoll与血清之间的界面层），并用5倍体积的PBS稀释。在室温下以500 × g的速度离心5分钟后，将PBMCs重悬于PBS中，并用PBS再次离心5分钟（500 × g，室温）进行洗涤。然后将PBMCs重悬于5 mL的ACK裂解缓冲液中，在室温下孵育5分钟以去除红细胞残留。孵育5分钟后，加入45 mL PBS，再在室温下以100 × g的速度离心15分钟。最后，将PBMCs重悬于培养基（含10% FBS和1%青霉素/链霉素的RPMI1640）中，用于设置细胞毒性和IFN-γ释放实验。