VHH 5A1人源化与亲和力成熟技术解析

对于VHH 5A1，人源化和亲和力成熟的任务被结合在一起。前者活动允许更快地开发TCE，后者则用于增强VHH-2-LC的细胞毒性特性（以R11-scFv-1作为我们的基准）。人源化后的5A1对ROR1的表观亲和力提高到约3 nM（补充图S1, S3）。携带人源化和亲和力成熟的VHH（hum-VHH-2-LC）的TCE与非人源化的VHH-2-LC以及未解耦的基准R11-scFv-1进行了比较（图4A）。使用人源化和亲和力成熟的变体后，T细胞介导的细胞毒性从EC50为74 pM增加到30 pM，Emax从76%增加到91%，这与R11-scFv-1相比没有显著差异。然而，在观察到最大杀伤作用的最低剂量下（细胞因子窗口的开始），hum-VHH-2-LC释放的IFNγ仍显著低于R11-scFv-1（图4B），但在细胞因子窗口结束时，这一差异缩小到基准的10-20%以内。重要的是，细胞因子窗口较大，代表了大约2个数量级的剂量范围。