双特异性CD3 x ROR1 TCE生成方法解析

在这里，我们描述了生成2+1格式的双特异性CD3 x ROR1 TCE（双特异性T细胞衔接器）的方法，其中蛋白质几何结构、肿瘤相关抗原（TAA）表位选择和桥接强度均经过调节，以生成具有较大细胞因子窗口的TCE。所有TCE都构建在IgG Fc knob-into-holes支架上（36），以延长半衰期，并通过引入LALA突变（37, 38）使其效应功能失活。 ROR1是一种受体酪氨酸激酶，被选为概念验证的TAA，原因如下：(a) 其结构域结构已得到充分描述（39）；(b) 可获得针对膜近端Kringle结构域（克隆R11）、中间距离的Frizzled结构域（克隆R12）（40）和远端Ig结构域（2A2）（41）的特异性抗体；(c) 已有研究表明，包含R12或R11的TCE表现出不同的效力，这与“动力学分离模型”一致，可以作为基准（40, 42, 43）。 ROR1在多种实体瘤和液体瘤细胞中广泛表达（44），因此是一个高价值靶点。ROR1在正常组织中的表达模式存在争议，可能包括胰腺、肠道和肝脏等器官（44）。这使得该TAA特别适合作为一个案例研究，用于解耦细胞毒性与细胞因子释放，从而产生较大的细胞因子窗口。