CD8+ T细胞活性检测实验指南

在250 U/mL IL-2中恢复48小时后，活化的CD8+ T细胞通过离心（500 × g，室温下5分钟）收集并重悬于培养基中。细胞活力通过台盼蓝排斥法测定。活化的恢复后的CD8+ T细胞调整至800,000个细胞/mL的浓度。从800,000个细胞/mL到6,250个细胞/mL（800,000个细胞/mL、400,000个细胞/mL、200,000个细胞/mL、100,000个细胞/mL、50,000个细胞/mL、25,000个细胞/mL、12,500个细胞/mL、6,250个细胞/mL）进行了2倍系列稀释，使用培养基进行稀释。使用多通道移液器，将不同密度的活化恢复后的CD8+ T细胞悬浮液小心地分配到96孔黑色透明平底组织培养板的指定孔中，每个孔加入50 μL悬浮液和5,000个靶细胞，用于测试样品或对照。每孔的效应细胞与靶细胞比例分别为：40,000个细胞（E:T比为8:1）、20,000个细胞（E:T比为4:1）、10,000个细胞（E:T比为2:1）、5,000个细胞（E:T比为1:1）、2,500个细胞（E:T比为1:2）、1,250个细胞（E:T比为1:4）、625个细胞（E:T比为1:8）、313个细胞（E:T比为1:16）。