CD3xROR1 T细胞接合器实验流程详解

CD3xROR1 T细胞接合器（TCEs）被制备并用含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素的RPMI1640培养基进行5倍连续稀释，浓度范围从200 nM到2.56 pM。将不同浓度的50 μL制备好的CD3xROR1 TCEs加入到96孔板中指定的孔内，与PBMC和靶细胞共孵育1、2或3天，温度为37°C，CO2浓度为5%。孵育结束后，96孔板在500 ×g下离心1分钟，使用多通道移液器将50 mL上清转移到V形底存储板中，用于IFN-γ释放测定。ONE-Glo荧光素酶检测试剂恢复至室温。然后向指定孔中加入50 μL ONE-Glo溶液，在室温下孵育2分钟。使用预设的生物发光协议在板读取器上测量生物发光强度。杀伤百分比通过以下公式计算：杀伤百分比 = 100 * (单独靶细胞的生物发光强度 - 样本的生物发光强度) / (单独靶细胞的生物发光强度 - 单独PBMC的生物发光强度)。