凋亡抑制与增强
除另有说明外，在指定条件下，以下浓度的试剂被加入到T细胞与靶细胞的共培养体系中：100 μg/mL 抗-PD-1（RPM1-14；Bio X Cell），100 μg/mL 抗-IFNγ（XMG1.2；Bio X Cell），25 μmol/L Z-IETD-FMK（Selleck），1 μmol/L 比林潘特（APExBIO Technology），100 nmol/L ABT-737（Selleck），1 nmol/L 泛比诺司他（Selleck），以及10 nmol/L S63845（Selleck）。筛选过程中使用的其他试剂包括维奈托克（Selleck）、恩替诺斯特（Selleck）和法塞汀（Sigma-Aldrich）。化合物筛选期间的Fas介导凋亡通过使用小鼠（Jo2，BD Biosciences；10 ng/mL）或人（CH11，Millipore；100 ng/mL）CD95的激动性抗体诱导。
CD3/CD19 双特异性T细胞接合器检测
从健康供血者的血液中通过密度梯度离心使用Ficoll Paque Plus（GE Healthcare）分离外周血单核细胞（PBMC），随后使用ACK缓冲液（Lonza）裂解红细胞。根据制造商的协议，使用MojoSort人CD8 T细胞分离试剂盒（BioLegend）负选择CD8+ T细胞。CD8+ T细胞在含有500 U/mL IL2（R&D Systems）的RPMI培养基中，添加10% FBS、100 U/mL青霉素/链霉素/氨苄青霉素和50 μmol/L 2-巯基乙醇，激活并扩增48小时。4 × 10^4预激活的CD8+ T细胞与1 × 10^4的CD19+/+FAS+/+、CD19−/−FAS+/+、CD19+/+FAS−/−和CD19−/−FAS−/− Raji细胞共培养72小时，培养基中含有500 U/mL IL2和100 pmol/L 膀胱瘤单抗，然后通过流式细胞术分析。所有Raji细胞均用CellTrace羧基荧光素二乙酸酯琥珀酰亚胺酯（CFSE；Thermo Fisher Scientific）标记，所有CD19+/+ Raji细胞还用CellTrace Violet（Thermo Fisher Scientific）标记，按照制造商的协议进行，以便在接种前用于设门。
