生物发光法检测CD8+ T细胞杀伤频率

测试样品和适当的阴性对照在培养基中以1 nM的浓度制备。将100 μL制备好的测试样品或阴性对照加入指定孔中，每孔含有5,000个靶细胞和不同数量的活化CD8+ T细胞。对于作为标准对照的不同数量的靶细胞孔，加入150 μL培养基以使总体积达到200 μL。细胞在37°C、5% CO2条件下孵育一天。孵育结束后，96孔板在500 × g下离心1分钟，使用多通道移液器将150 mL上清液转移至V型底存储板中备用。ONE-Glo荧光素酶检测试剂恢复至室温。然后向指定孔中加入50 μL ONE-Glo溶液，在室温下孵育2分钟。使用预设的生物发光协议在读板仪上测量生物发光强度。为了计算杀伤频率，将作为标准对照的不同接种数量的靶细胞的生物发光强度与细胞数量绘制标准曲线。通过标准曲线，使用每个测试样品孔的生物发光强度计算每个测试样品孔中的存活靶细胞数量。通过从5,000（靶细胞的接种数量）中减去每个测试样品孔中计算出的存活靶细胞数量，得到被杀伤的靶细胞数量。每个孔中的靶细胞杀伤频率通过将被杀伤的靶细胞数量除以同一孔中输入的CD8+ T细胞数量来生成。