Par3-OGDH相互作用定位难题：如何通过基质限制实验验证线粒体结合？

Par3-OGDH 相互作用发生的亚细胞区室尚未通过分级限制实验直接证明。尽管共定位（图 2C）和邻位连接分析（PLA）（图 2D，图 S2A）表明这种相互作用可能靠近线粒体，但这些结果并不能确定结合是否发生在线粒体内而不是混合的细胞裂解物中。共免疫沉淀（co-IP）实验（图 2E-2F）似乎是使用全细胞提取物进行的，这无法排除胞质或非基质内的相互作用。这一担忧得到了证据的支持，即 OGDH 类似蛋白可以表现出意外的亚细胞定位，包括核定位而非线粒体定位 [1]。进行基质限制的共免疫沉淀或蛋白酶保护的线粒体共免疫沉淀可以解决这一问题。