PBMC与T细胞处理技术指南

新鲜的PBMCs或恢复的T细胞在室温下以500 × g离心5分钟，然后重悬于培养基中。通过台盼蓝排斥法测定细胞活力。将活PBMC的密度调整为3百万个细胞/mL，使用含10% FBS和1%青霉素/链霉素的RPMI1640培养基；而活T细胞的密度则调整为0.5百万个细胞/mL，同样使用含10% FBS和1%青霉素/链霉素的RPMI1640培养基。经过4-5小时的孵育后，小心地从含有靶细胞的96孔板中移除培养基。向指定的孔中加入50 μL 3百万个细胞/mL的PBMC悬液（150,000个PBMC）或50 μL 0.5百万个细胞/mL的T细胞悬液（25,000个T细胞），这将导致PBMC的E:T比为30:1，T细胞的E:T比为5:1。对于其他E:T比，效应细胞在RPMI1640培养基中以特定密度重悬，其中含有10% FBS和1%青霉素/链霉素，以确保在50 μL细胞悬液中获得所需的效应细胞数量。