LGR5 mRNA检测与RNAscope®试剂盒使用指南

LGR5 mRNA 的检测使用 RNAscope® 试剂盒（Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, USA）按照制造商的说明进行，采用未染色的样本组织切片。简而言之，组织切片经加热预处理后，应用蛋白酶，然后与 LGR5 特异性探针杂交。详细步骤已在先前的文献中描述 [16]。核和/或细胞质中出现的棕色点被认定为阳性染色。LGR5 表达量使用制造商推荐的五级评分系统进行量化（0，无染色；1，1-3 个点/细胞；2，4-10 个点/细胞；3，>10 个点/细胞；4，>15 个点/细胞且 >10% 的点聚集）。H 分数计算公式为：（1 级细胞百分比 × 1）+（2 级细胞百分比 × 2）+（3 级细胞百分比 × 3）+（4 级细胞百分比 × 4）。每位患者的总体 H 分数基于每个高倍视野（400 倍放大）的 H 分数计算。此外，任何含有一个或多个点的细胞均被视为 LGR5 阳性。