hum-VHH-2-LC旁观者杀伤机制解析

图6展示了我们对hum-VHH-2-LC和基准物旁观者杀伤效果的评估结果。旁观者杀伤定义为在ROR1阳性肿瘤存在的情况下，杀死TAA阴性（本例中为ROR1）的肿瘤细胞，因此，这是在表达不同水平TAA的肿瘤中杀伤肿瘤的重要组成部分，在实体瘤环境中非常常见。已有报道指出，旁观者杀伤是由死亡受体（如FAS）与黏附分子（如ICAM-1）协同诱导的，且这两者的上调依赖于IFNγ（6）。因此，问题在于解耦的hum-VHH-2-LC是否能诱导足够的IFNγ释放以实现旁观者杀伤。为此，我们考察了hum-VHH-2-LC和基准物R11-scFv-1诱导扩增的T细胞对ROR1阳性的MDA-MB-231、ROR1阴性的T-47D肿瘤细胞或两者的1:1混合物的杀伤动力学。这在hum-VHH-2-LC的细胞因子窗口内的多个浓度下进行。图6显示了一个示例浓度（1 nM），该浓度仅约为细胞因子窗口的10%。在细胞因子窗口内观察到了剂量反应（补充图S4）。结果显示，hum-VHH-2-LC在诱导直接杀伤ROR1阳性的MDA-MB-231和旁观者杀伤ROR1阴性的T-47D方面与R11-scFv-1一样有效。这表明，与hum-VHH-2-LC相关的细胞因子窗口可以支持IFNγ依赖的异质肿瘤杀伤。当ROR1阳性的MDA-MB-231与ROR1阴性的T-47D细胞共培养时，其杀伤动力学与单独培养的MDA-MB-231相似。先前的研究已显示，这种早期的TAA+靶标的直接杀伤是由穿孔素/颗粒酶介导的（6）。相比之下，只有在与MDA-MB-231共混时，ROR1阴性的T-47D才发生旁观者杀伤，并且延迟约35小时（通过混合物中ROR1+和ROR1-肿瘤细胞的IC50VIABILITY差异测量）。这一观察结果与之前关于BiTE靶向EGFR诱导的细胞因子依赖性旁观者杀伤的报告一致（6）。