EGFR 抗体和 BiTE® 结合
将 SW620 细胞和 NUGC4 细胞在冰上与梯度稀释的西妥昔单抗（C225 抗体，0.02-20 μg/mL）、EGFR 或 MEC14 BiTE1（0.02-1000 nM）在 FACS 缓冲液（PBS/2% FBS）中孵育 30 分钟，然后用冰冷的 FACS 缓冲液洗涤两次，并在冰上与检测抗体（山羊抗人 AlexaFluor 488 用于 C225 抗体，抗 His Alexa Fluor 647 用于 BiTE1s）孵育 30 分钟，再洗涤两次。细胞重悬于含有碘化丙啶的 FACS 缓冲液中以排除死细胞，并在 CANTO 流式细胞仪上进行分析。
计算、图表和统计
细胞毒性通过细胞成像（核计数）或发光法测定。特异性细胞毒性百分比 = 100 × [1 - (BiTE1 处理组单位 / 未处理对照组单位)]，其中单位为发光单位（Steady-Glo™ 或 CellTiter-Glo™，Promega）。使用 GraphPad Prism™ 6.07 进行图形生成和分析。剂量反应曲线拟合采用四参数可变斜率非线性回归。统计显著性通过非配对 t 检验和双尾 P 值确定；对于方差不等的情况，使用 Welch 校正。
