Fas介导的T细胞旁观者杀伤机制研究

Fas 介导T 细胞旁观者杀伤 尽管我们的模型系统显示了对 Fas−/− Ag+ 细胞的明显保护作用，但也显示了 GFP+/mCherry+ 比值（补充图 S2C）在 T 细胞依赖的情况下显著增加，这表明 Fas−/− GFP+ (Ag+) 细胞增殖增加或 mCherry+ (Ag−) 细胞清除增加。绝对细胞计数的测量证实了后者，并展示了 Ag− 细胞的意外耗竭——即使在 Fas−/− Ag+ 细胞只有部分保护的情况下——这一现象被使用比值作为细胞毒性的替代指标所掩盖（补充图 S3A）。通过密切的 T 细胞剂量滴定实验发现，在某些条件下，mCherry+ 细胞的杀伤可以超过 GFP+ 细胞的杀伤（补充图 S3A），导致 GFP+/mCherry+ 比值增加。这种 Ag− 肿瘤细胞死亡的现象——在此称为旁观者杀伤——即使在非常低的效应细胞:靶细胞比例下，在野生型设置中也能观察到，并且仅在存在抗原特异性（四聚体分选）T 细胞时出现，而预先激活的非特异性 T 细胞则不行（图 2A）。通过系统中缺乏 CD4 T 细胞污染排除了 MHC II 类介导的杀伤作用（补充图 S3B）。Transwell 实验确认这种旁观者杀伤是接触介导的，并且需要共定位的 Ag+ 细胞（图 2B，紫色高亮；量化见补充图 S3C）来诱导 Ag− 细胞的旁观者凋亡。鉴于我们观察到 Fas 依赖的抗原特异性细胞毒性，我们假设它也可能在这种旁观者细胞毒性中起作用。将 GFP(WT) 与 mCherry(Fas−/−) 细胞在 JEDI T 细胞存在下共培养完全消除了 mCherry(WT) 细胞观察到的 Ag− 人群的耗竭，证实了这种旁观者效应是由 Fas 介导的（图 2C，左）。值得注意的是，mCherry(B2m−/−) 细胞同样容易受到旁观者杀伤，排除了抗原交叉反应或外源加载 MHC I 类分子作为可能的解释（图 2C，左）。在 GFP(B2m−/−) 细胞存在的情况下，旁观者杀伤也被消除，表明局部 T 细胞受体 (TCR)–肽–MHC 激活由 Ag+ 细胞介导是 T 细胞对 Ag− 细胞施加接触介导的细胞毒性所必需的（图 2C，右）。尽管在含有 Ag− 细胞的腔室中有预先激活的 JEDI 存在，但没有发生旁观者凋亡，这证实了 T 细胞的同时和局部激活是必要的（图 2B，橙色高亮；补充图 S3C），这与表面 FasL 活性的严格调控一致（36），同时也排除了通过微囊泡（37）或外泌体（38）远距离传递活性 FasL 的可能性。