BiTE1抗体构建物中旁观者TAA阴性细胞的裂解机制研究

旁观者TAA阴性细胞的裂解在BiTE1抗体构建物中尚未有报道。一项使用短期显微镜检测评估旁观者杀伤的研究报告称，没有观察到邻近的靶标阴性细胞的裂解[24]。类似的显微镜结果也见于ImmTACs，这是一种类似于BiTE1的技术，靶向MHC/肽复合物[37]。在这里，我们首次提供了证据，表明BiTE1激活的T细胞可以在存在TAA表达的靶细胞时裂解非TAA表达的旁观者细胞，并确定了旁观者杀伤的可能机制。初始比例为一个TAA阳性靶细胞对三个TAA阴性旁观者细胞就足以在低皮摩尔浓度的BiTE1抗体构建物下观察到共培养物中完全的旁观者细胞裂解。类似地，在小鼠模型中，即使肿瘤最初含有50%的非TAA表达的癌细胞，也观察到了几乎完全抑制异种移植瘤的生长。这些观察结果似乎与BiTE1激活的T细胞通过在TAA表达细胞和T细胞之间形成的细胞毒免疫突触裂解靶细胞的观点相矛盾。因此，我们进一步详细研究了BiTE1激活的T细胞旁观者杀伤的模式。 我们在SW620细胞中未检测到经BiTE1或细胞因子（IFNγ和TNFα）处理后诱导的任何EGFR靶标表达（图S7），排除了新靶标表达作为旁观者杀伤机制的可能性。我们进一步确定，BiTE1激活的T细胞与旁观者细胞之间的接近是必需的，旁观者细胞的裂解发生在18-48小时后。尽管旁观者杀伤的确切机制尚待确定，但我们证明了靶标阴性旁观者细胞的裂解依赖于细胞因子，需要与BiTE1激活的T细胞接触，并涉及TAA阴性细胞上ICAM-1和FAS的上调。