旁观者杀伤在CAR-T细胞疗法中的关键作用

旁观者杀伤在免疫疗法中至关重要 为了将这些概念转化为具有临床意义的T细胞疗法，我们获取了健康供者的T细胞，并测量了CD3/CD19双特异性T细胞接合器（blinatumomab）介导的对靶向CD19+/+和旁观者CD19−/− Raji淋巴瘤细胞的细胞毒性（补充图S5A）。与小鼠模型一样，我们再次观察到使用IAP和BCL2家族成员MCL1的抑制剂增强了Fas依赖性的靶向细胞（图3E）和旁观者细胞（图3F）的杀伤作用，而没有对共培养的T细胞产生任何毒性（补充图S5B和S5C）。 为了评估这些发现对CAR-T细胞的相关性，CAR-T细胞利用的激活信号与内源性T细胞不同，可能导致不同的效应功能，我们测试了一种靶向CD19的CD3ζ-CD28 CAR构建体（43），将其转导至野生型同基因CD8 T细胞中。通过共培养CD19+或CD19−以及WT或Fas−/−淋巴瘤细胞，我们再次观察到缺乏表面Fas的Ag+靶细胞对CAR-T杀伤的抵抗（图4A）。细胞计数的定量显示，尽管Fas介导的细胞毒性在CAR-T靶向杀伤中起了一定作用（图4B，黑色/灰色），但它几乎贡献了所有检测到的旁观者杀伤（图4B，红色/粉色）。为了模拟体内治疗抗原丢失逃逸肿瘤，我们在CAR-T治疗前接种了均质（100% CD19+）或异质（95% CD19+/5% CD19−）肿瘤。虽然未经治疗的小鼠在均质和异质肿瘤中死亡速度相似（中位生存期24-25天），但CAR-T治疗延长了均质肿瘤组的生存期（中位生存期42天），同样延长了异质肿瘤组的生存期（中位生存期41天），这表明抗CD19 CAR-T细胞对CD19−肿瘤具有一定的保护作用（图4C，实线）。系统性FasL阻断严重损害了CAR-T的疗效，重申了靶向CAR-T细胞毒性的Fas–FasL依赖性（图4C，虚线）。然而，最值得注意的是，在FasL阻断的情况下，异质肿瘤组的生存期显著差于均质肿瘤组（图4C，突出的虚线；中位生存期分别为30.5天和34天）。这些发现表明，Fas–FasL信号传导对CAR-T细胞对导致疾病复发的抗原丢失变体的旁观者细胞毒性至关重要。