1 材料与方法
1.1 实验动物：雌性SPF级SD大鼠，体重180-200g。
1.2 试验产品：重组贻贝粘附蛋白水凝胶敷料，商品名战颜 × 安一家，注册号湘吉准字20222142096，规格0.5 mg/g × 15 g/瓶，批号230203，有效期至20250220，由战颜生物科技有限公司提供；胶原蛋白凝胶，规格0.5 mg/g × 15 g/瓶，批号230202，有效期至20250202，由战颜生物科技有限公司提供。
1.3 试剂：硫化钠（规格5 g/瓶，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；戊巴比妥钠（规格5 g/瓶，国药集团化学试剂有限公司）。大鼠白细胞介素（IL）2、IL-6、干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（江苏酶免实业有限公司，目录号MM-0192R1、MM-0190R1、MM-0198R1、MM-0180R1）。PI3K、AKT、p-AKT、mTOR抗体（规格10 µL/管，目录号ab191606、ab179463、ab81283、ab32028，Abcam公司）；p-mTOR抗体（规格20 µL/管，目录号5536，CST公司）。Molpure® 细胞/组织总RNA提取试剂盒（规格50次，目录号19221ES50，翌圣生物）；PrimeScript RT试剂盒（规格100次，目录号RR047A，博瑞生物技术有限公司）；TB Green™ Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（规格200次，目录号RR820A，博瑞生物技术有限公司）。
1.4 仪器：DH-006型美容去痣笔（广州白云汉达电子厂），超声细胞破碎仪，型号JY92-IIN，宁波新驰生物科技有限公司；台式高速冷冻离心机，型号H2050R，湘仪集团；恒温金属浴，型号TU-10，上海一恒科技有限公司；低温高速组织研磨器，型号KZ-III-F，赛百盛生物技术有限公司；荧光图像分析系统，型号5200 Multi，同力生物技术有限公司。实时定量PCR（RT-PCR）仪，型号QuantStudio™ 3，美国赛默飞世尔科技公司；高速低温组织研磨器，型号KZ-III-F，武汉海景视生物技术有限公司；热循环仪，型号TCA0096，美国赛默飞世尔科技公司。
2 实验方法
2.1 大鼠浅Ⅱ度急性损伤创面模型的建立：使用体重180至200 g的SD大鼠。用电推子去除大鼠背部毛发，随后在皮肤上均匀涂抹8%硫化钠。30秒后，用温水冲洗皮肤以去除硫化钠和残留毛发。待背部干燥后，通过腹腔注射60 mg/kg戊巴比妥钠麻醉大鼠。在每只大鼠的背部标记四个1.5 cm × 1.5 cm的正方形区域，分别作为正常对照组、模型对照组、rMAP组和胶原组。除正常对照区域外，其他区域用设定为7级的激光笔，距离表面约1 mm处照射2至3秒，建立急性皮肤损伤模型。根据《外科学》中描述的烧伤“三度四分法”分类标准评估浅Ⅱ度皮肤急性损伤模型的成功与否[2]。
2.2 各组大鼠创面组织的病理学检查[3]：使用20只SD大鼠，按照2.1节的方法建立浅Ⅱ度皮肤急性损伤模型。将大鼠分配到D1、D3、D7和D14时间点，每个时间点5只大鼠。每只大鼠的背部分为四个区域：正常对照组A、模型对照组B、rMAP组C和胶原组D。rMAP组和胶原组接受相应的实验药物，而正常对照组和模型对照组则接受等体积的生理盐水溶液（每区域5 µL，每日两次，早晚各一次）。每个时间点的连续治疗期分别为1天、3天、7天和14天。在适当的时间点，通过腹腔注射60 mg/kg戊巴比妥钠处死大鼠，收集每个区域的皮肤组织样本并固定于4%多聚甲醛溶液中。组织经HE染色后，使用Pannoramic 250数字切片扫描仪在200×显微镜下拍摄图像，观察病理学变化。
2.3 细胞因子检测：使用15只SD大鼠，按照2.1节的方法建立浅Ⅱ度皮肤急性损伤模型。模型建立24小时后，对每只大鼠背部的各个区域施用相应的实验药物。正常对照组和模型对照组接受等体积的生理盐水（每区域5 µL，每日两次，早晚各一次），连续7天。最后一次给药后24小时，通过腹腔注射60 mg/kg戊巴比妥钠处死大鼠，切除背部分区标记的创面区域，立即储存在-80°C备用。
2.4 大鼠皮肤创面PI3K、AKT、p-AKT、mTOR和p-mTOR蛋白表达的Western Blot分析：从每个组别储存在-80°C的创面组织中提取总蛋白，使用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。依次进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜和一抗（PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、β-actin）孵育。膜在4°C过夜封闭后，在室温下与二抗（1:5000）孵育2小时。使用ECL检测试剂盒显影蛋白质，通过化学发光成像系统拍摄图像，分析目标蛋白的相对表达水平。
2.5 大鼠皮肤创面EGF mRNA、FGF-2 mRNA和VEGF mRNA表达的PCR分析：取储存在-80°C的样品约10-20 mg置于EP管中，加入350 µL裂解缓冲液LB。使用高速低温组织研磨器匀浆化样品，将匀浆液转移到结合柱中并离心。弃去上清液，重复此过程以提取总RNA。从总RNA合成cDNA，以第一链cDNA为模板进行PCR扩增，获得基因cDNA克隆。从NCBI数据库中检索基因的全长序列，并使用Primer软件设计每个基因的特异性引物。所有引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成和纯化（见表4）。使用Thermo Scientific PikoReal软件分析PCR产物的CT（阈值循环）值。使用2-ΔΔCT方法计算相对mRNA表达水平：ΔCT = 目标基因CT - 参考基因CT，ΔΔCT = 实验组ΔCT - 对照组ΔCT，mRNA表达量的变化倍数表示为2-ΔΔCT。
