EGFR阴性细胞在BiTE®激活下的旁观者杀伤效应

EGFR 阴性旁观者细胞在与 EGFR 阳性细胞共培养时变得对 BiTE® 激活的 T 细胞敏感而被裂解。 为了评估旁观者杀伤效应，不同比例的 EGFR 阳性和阴性细胞与人类 T 细胞混合，并在广泛的 EGFR BiTE1 浓度范围内确定重定向裂解情况。使用基于图像的测定法量化细胞毒性，其中通过抗 EGFR 抗体（图 S2A 和 S2B）识别 EGFR 阳性细胞。无论存在多少 EGFR 阴性细胞，EGFR 阳性细胞的裂解 EC50 值为 0.4 pM EGFR BiTE1（图 3A）。EGFR 阴性细胞也被裂解，但这严格依赖于 EGFR 表达细胞的存在。EGFR 阳性与阴性细胞的初始比例为 1:3 即足以诱导 EGFR 阴性旁观者细胞的显著裂解，EC50 值为 3.2 pM EGFR BiTE1。随着 EGFR 阳性细胞比例的增加，EGFR 阴性细胞裂解的 EC50 值进一步降低至 1.5 pM（1:1 比例）和 1.4 pM（3:1 比例）（图 3B）。旁观者杀伤效应对 BiTE1 浓度和靶标阳性细胞比例的依赖性是可重复的。另一项实验中使用更多的重复次数和更少的 BiTE1 剂量（图 S2C）确认了 EGFR 阴性细胞对旁观者杀伤的敏感性取决于 BiTE1 剂量和存在的 EGFR 阳性细胞比例。类似于观察到的细胞毒性，细胞因子释放（IFNγ，图 3C 和 TNFα，图 3D）以及 T 细胞激活（图 3E）在含有 EGFR 阳性和阴性细胞的培养物中均可检测到。释放的量和 T 细胞激活的程度取决于 EGFR 阳性与阴性细胞的比例和 BiTE1 浓度。