图 S4. 活化 T 细胞分泌的可溶性因子或外源添加的因子没有直接细胞毒性。EGFR BiTE1、T 细胞和 NUGC4 细胞（10:1 效靶比）在 96 孔板中共培养 48 小时；上清液要么 (A) 直接转移（转移培养基 + T 细胞），要么 (B) 通过离心澄清（仅转移培养基）后再转移到含有 SW620 细胞的 96 孔板中，继续培养 48 小时。(C) SW620 和 T 细胞与 EGFR BiTE1 共培养 48 小时（无转移对照）。(D) 单独的 T 细胞或 T 细胞 + EGFR BiTE1 + NUGC4 细胞被加入到具有 1 μm 和 5 μm 膜的 Transwell1 测定的上室。72 小时后，使用 CellTiter-Glo1 (Promega) 测定下室中的 T 细胞数量，并确定穿过每种膜的 T 细胞百分比（与初始接种时放置在下室中的等量 T 细胞相比）。(E) NUGC4 细胞和 SW620 细胞分别用 IFNγ 和 TNFα 单独或联合处理 24 小时；通过成像测定法测定细胞数。（N = 3，所有测定的平均值 ± 标准差）。(TIF)
图 S5. 代表性图像显示重组细胞因子和 BiTE1 活化的 T 细胞诱导的 ICAM-1 和 FAS 表达。图 6 的免疫荧光图像显示 NUGC4 细胞中 ICAM-1 的上调由 (A) 12.5 ng/ml IFNγ + TNFα 或 (B) 33 pM BiTE1 诱导（A, B，蓝色为核染色，红色为 ICAM-1 染色）。SW620 细胞中 ICAM-1 的上调由 (C) 12.5 ng/ml IFNγ + TNFα 或 (D) BiTE1 活化的 T 细胞诱导的代表性图像。SW620 细胞中 FAS 的上调由 (E) 12.5 ng/ml IFNγ + TNFα 或 (F) BiTE1 活化的 T 细胞诱导的代表性图像（C-F，蓝色为核染色，绿色为 ICAM-1 或 FAS 染色）。比例尺 = 30 μm。(TIF)
图 S6. 在 SW620 细胞中，FAS 激动剂抗体仅在细胞因子预处理后诱导旁观者杀伤作用。细胞因子预处理（左图）或未处理（右图）的 SW620 细胞在加入 FAS 激动剂抗体前 1 小时孵育于 FAS 中和抗体或对照抗体中 24 小时。通过成像测定法测定细胞数；N = 6，平均值 ± 标准差。显著性值：ns，P > 0.05；* P < 0.05；** P < 0.01；*** P < 0.001；**** P < 0.0001。(TIF)
