人源化VHH-2-LC在肿瘤免疫治疗中的应用

满足解耦标准的基于VHH的构建体是VHH-2-LC。重要的是，与之前描述的R11基TCE（42）相比，VHH-2-LC诱导的IFNγ释放显著降低。为了降低免疫原性风险，VHH-2进行了人源化改造，并通过亲和力成熟来提高效力并优化细胞因子窗口。携带人源化VHH的TCE（hum-VHH-2-LC）显示出与非人源化亲本相似的解耦比，但其T细胞介导的杀伤能力与R11-scFv-1相当，且细胞因子窗口范围从R11-scFv-1释放量的大约15%到90%。与非解耦的R11-scFv-1相比，hum-VHH-2-LC表现出更好的连续杀伤能力。此外，hum-2-VHH-LC能够诱导旁观者杀伤，类似于R11-scFv-1，这直接表明hum-VHH-2-LC具有靶向表达不同水平ROR1的肿瘤的能力，并间接提示hum-VHH-2-LC可以促进免疫细胞浸润肿瘤并诱导内源性和持久的肿瘤特异性免疫。与参考物R11-scFv-1相比，hum-VHH-2-LC还导致T细胞耗竭标志物CD69、PD-1和TIGIT（51-54）的上调较少，这表明hum-VHH-2-LC可能与改善的T细胞功能状态进一步相关。据我们所知，hum-VHH-2-LC是第一个报道的不仅从TIGIT和PD-1，还从早期激活标志物CD69解耦细胞毒性的TCE。这一观察结果表明，细胞裂解颗粒的释放可以与CD69的表达解耦。它进一步支持了与耗竭的解耦，因为CD69也被报告构成早期耗竭的功能标志物（51）。