人CD8+ T细胞的分离、活化及复原技术详解

人CD8+ T细胞的分离、活化及复原 从健康供者的全血中按照上述程序分离出PBMCs。使用STEMCELL公司的EASAYSEP人CD8+ T细胞分离试剂盒从新鲜的人PBMCs中分离CD8+ T细胞。简而言之，PBMCs与分离抗体混合液（试剂盒提供）在不含Ca2+和Mg2+的PBS中混合，其中含有2% FBS和1 mM EDTA。在室温下孵育5分钟后，加入RapidSpheres™磁珠（试剂盒提供），然后立即将混合物置于STEMCELL的EASY50 EASYSEP磁铁上。在室温下孵育10分钟后，收集混合溶液中的细胞并再次置于STEMCELL的EASY50 EASYSEP磁铁上。在室温下孵育5分钟后，收集纯化的CD8+ T细胞并离心沉淀。纯化的CD8+ T细胞被冷冻保存在液氮中以备进一步使用。 为了扩增CD8+ T细胞，将纯化的人CD8+ T细胞重悬于STEMCELL的ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基中。向T细胞中加入STEMCELL的ImmunoCult™人CD3/CD28 T细胞激活剂和R&D Systems的100 U/mL人IL-2，以激活细胞12天。在12天的扩增期间，每当细胞密度超过每毫升1百万个细胞时，向细胞中添加含100 U/mL人IL-2的新鲜ImmunoCult™-XF T细胞扩增培养基。12天扩增结束后，扩增的CD8+ T细胞被冷冻保存在液氮中。 为了复原CD8+ T细胞，将扩增的CD8+ T细胞或CD8+ T细胞从液氮中取出并在37°C水浴中解冻。CD8+ T细胞重悬于含10%热灭活FBS和250 U/mL人IL-2的RMPI1640培养基中。在37°C下孵育48小时后，CD8+ T细胞准备好用于进一步使用。