TOM/TIM前导序列导入验证：如何建立膜电位依赖性的直接证据？

功能对TOM/TIM前导序列导入途径的依赖（例如，Δψm依赖性、TIM23/TOM20需求）尚未直接证明。尽管相互作用数据（图1L–O）和线粒体靶向序列（MTS）定位（图1F–I）非常有说服力，但它们并未建立TOM/TIM机器对Par3导入的必要性。直接干扰前导序列导入（例如，膜电位崩溃或TIM23/TOM20的急性耗竭），并展示线粒体中Par3的减少，可以因果地将该途径与导入联系起来。存在标准方法来测试膜电位依赖性[1]和组分需求[2]，这使得验证实验成为可能。没有这些测试，尽管有强烈的定位和相互作用证据（图1A–E，1F–O），关于机制上“通过TOM/TIM”的部分声明仍然是推断性的。