细胞毒性实验中的EGFR BiTE1效应分析

细胞以每孔10,000个细胞的密度接种在黑色Packard ViewPlate-96板（Perkin Elmer）中。加入Pan-T细胞以及滴定的EGFR BiTE1。对照孔不含BiTE1（有或无T细胞）。48小时后，通过细胞核计数使用细胞成像测量细胞毒性。洗涤后，细胞用3.7%甲醛固定，并用Hoechst核染料（Invitrogen）染色。在Thermo ArrayScan™ VTI上，从2-6个重复孔中计数9-16个10倍视野的细胞核，使用核通道中的大小阈值排除任何剩余的T细胞。在某些实验中，细胞毒性通过CellTiter-Glo1（Promega）或同时使用细胞成像和CellTiter-Glo1测量。两种方法测得的细胞毒性EC50值具有良好的一致性。在一些同时测量多个参数的实验中，为了确保实验质量和可行性，重复孔限于双重复板或双重复孔。在这些大型成像数据集中，每个数据点代表数百到数千个单个细胞的平均值，双重复显示了良好的精确度，剂量反应数据显示了与应用BiTE1量相关的改变。 混合培养TDCC实验 NUGC4（EGFR阳性）和SW620（EGFR阴性）细胞按不同比例混合，并按上述方法处理。固定后的细胞用抗EGFR抗体（ThermoFisher）和Hoechst染料染色。通过EGFR通道中的强度阈值将细胞分类为EGFR阳性和EGFR阴性；细胞核计数方法同上。单独使用NUGC4和SW620细胞的对照孔用于确认群体分析的准确性。