方法
伦理合规 患者治疗、人类样本收集与分析的方案已获得西奈山机构审查委员会的批准，所有患者均按照《赫尔辛基宣言》的要求签署了书面知情同意书。所有涉及人体标本的实验均符合相关伦理规定。
动物 BALB/c 和 BALB/c(Rag1−/−) 小鼠购自杰克逊实验室，并饲养在西奈山伊坎医学院的动物设施中。JEDI 小鼠（29）在我们的设施中被回交到 BALB/c 背景上八代。所有实验均经西奈山伊坎医学院的机构动物护理和使用委员会审查并批准。
细胞系 所有细胞系（A20、4T1 和 Raji）均在 37°C、5% CO2 条件下，用补充有 10% 灭活胎牛血清（FCS）、青霉素/链霉素和 50 μmol/L β-巯基乙醇的 RPMI 培养基中培养。通过转导编码 Cas9 的慢病毒（lentiCRISPRv2；Addgene 质粒 #52961）并筛选嘌呤霉素抗性细胞，生成稳定表达 Cas9 的细胞系。单基因敲除细胞系通过克隆特定的单导向 RNA（sgRNA；补充表 S1；Fas 5′-GGCGTCCCAAAGCTTACCAG-3′），然后进行转导和流式细胞术纯化来生成（63）。为了控制克隆异质性，从亲本细胞系中取 1×10^6 个细胞，以感染复数（MOI）为 10 进行转导。经过 5 天的生长后，通过流式细胞术纯化 1×10^6 个表面 Fas 表达阴性的细胞，并作为敲除细胞系进行传代培养。通过 Western 印迹（抗 Cas9，克隆 7A9，Millipore）确认 Cas9 的表达。A20-Cas9 细胞随后以 10 MOI 转导 GFP 或 mCherry 慢病毒载体，1 周后通过流式细胞术纯化稳定的 GFP+ 或 mCherry+ 细胞（约 10%）。用于文库筛选的细胞在转导前 1 天一直维持在嘌呤霉素中。A20(CD19+) 和 A20(CD19−) 细胞系通过流式细胞术纯化生成。4T1-GFP 和 4T1-mCherry 细胞系由布朗实验室（西奈山）赠送。Raji 细胞由多明格斯-索拉实验室（西奈山）赠送。未进行细胞系鉴定，但每年通过 PCR 检测支原体。细胞系在从冷冻库存中解冻后 2 周内用于实验。
