Fas在T细胞免疫治疗中的关键作用

结果 Fas 是关键的 T 细胞效应分子 使用由 GFP 特异性（JEDI）CD8 T 细胞（29, 30）、Ag+ A20-GFP 细胞和 Ag− A20-mCherry 细胞组成的简化三细胞系统（图 1A），我们对 GFP+ 细胞群施加了强烈的迭代抗原特异性 T 细胞选择压力（补充图 S1A），并对存活细胞进行了测序，以测量靶基因频率的变化（补充图 S1B）。筛选中靶向的 291 个基因（补充表 S1）经过人工整理，以在我们的癌症模型中高表达，并富含免疫相关功能注释。通过在 mCherry+ 细胞中测量的频率进行内部对照，显著偏离预期频率的靶基因在 GFP+ 细胞中得到了控制（补充图 S1C）。如预期的那样，敲除 B2m 和 Tap1 基因（补充图 S1D 和 S1E）的克隆在选择后高度富集（P <1e−14；图 1B；补充图 S1C）。MHC I 类表达丧失的 Ag+ 细胞在蛋白质水平上得到了确认（补充图 S1F 和 S1G），此外，PD-L1 缺失细胞的相对减少也符合预期（补充图 S1F 和 S1H）。令人惊讶的是，Fas 敲除克隆同样高度富集（P <1e−14；图 1B；补充图 S1C 和 S1I），这一发现与最近其他基于 T 细胞的筛选结果不同（31–34）。为了验证这一点，我们创建了多克隆衍生的稳定 Fas 敲除 A20 淋巴瘤和 4T1 乳腺癌细胞系（图 1C），这些细胞系没有可检测到的表面 Fas 蛋白表达（补充图 S2A），并且对 Fas 诱导的细胞死亡具有抵抗力（补充图 S2B）。尽管野生型（WT）GFP+ 细胞被 JEDI 耗尽，但在相同的条件下，Fas 阴性的淋巴瘤（图 1D；定量见补充图 S2C）和乳腺癌（图 1E；定量见补充图 S2D）表现出对杀伤的抵抗，尽管在这两种条件下 T 细胞增殖、颗粒酶 B 产生和脱粒均非常活跃（图 1F）。类似地，由细菌毒素非特异性结合 MHC 分子到 T 细胞受体介导的 CD8 和 CD4 T 细胞超抗原诱导的细胞毒性也高度依赖于 Fas 表达（补充图 S2E），而辐射诱导的凋亡则不然（补充图 S2F），这表明其对 T 细胞介导的杀伤具有特异性。 鉴于 granzyme 分泌 T 细胞被认为是杀死转化细胞的主要途径（35），因此对 granzyme 分泌 T 细胞的抵抗令人惊讶。使用四聚体分选的 GFP 特异性 CD8 T 细胞的体内过继转移模型，我们观察到 Fas−/− GFP+ 肿瘤比野生型对照组更早复发（图 1G；个别曲线见补充图 S2G），验证了我们的体外发现。尽管 T 细胞浸润相当，但死亡的 Fas−/− 肿瘤细胞中细胞外凋亡介质 caspase-8 的活化显著降低，证实了 Fas 介导的细胞毒性的在体作用（图 1H 和 I）。同时，在 T 细胞挑战下，Fas−/− 肿瘤中 GFP 的染色强度更高（图 1I），而在对照小鼠中则不然（补充图 S2H 和 S2I），证实了 Fas−/− 肿瘤细胞的生存增加。综上所述，这些数据验证了 Fas 作为抗原特异性 T 细胞免疫治疗中细胞毒性的关键介质的重要性，即使在存在其他介质（如颗粒酶）的情况下也是如此。