旁观者杀伤实验
在实验设置前一天，从靶细胞系（ROR1+ MDA-MB-231 RFP 细胞或 ROR1- T-47D eGFP FLUC 细胞）中移除选择性抗生素。在实验设置当天，通过短暂的 TrypLE 处理收集靶细胞系，然后在室温下以 500 × g 离心 5 分钟，用培养基洗涤。使用 Cellometer 通过台盼蓝排除法测定靶细胞系的活力。调整活细胞密度至 50,000 个细胞/mL 的培养基中。使用多通道移液器将 100 μL ROR1- 靶细胞悬液（5,000 个细胞）小心地加入到 96 孔黑色透明平底细胞培养板的指定孔中，用于仅含 ROR1- 靶细胞的组。将 100 μL ROR1+ 靶细胞悬液（5,000 个细胞）加入到 96 孔黑色透明平底细胞培养板的指定孔中，用于仅含 ROR1+ 靶细胞的组。对于同时含有 ROR1+ 和 ROR1- 靶细胞的组，将 100 μL ROR1- 靶细胞悬液（5,000 个细胞）和 100 μL ROR1+ 靶细胞悬液（5,000 个细胞）加入到 96 孔黑色透明平底细胞培养板的指定孔中。将培养板在细胞培养箱中孵育 4-5 小时，以确保靶细胞已附着在 96 孔板底部。
恢复的 T 细胞在室温下以 500 × g 离心 5 分钟，然后重悬于培养基中。调整活 T 细胞密度至 0.5 百万个细胞/mL 的 RPMI1640 培养基中，含 10% 胎牛血清和 1% 青霉素/链霉素。孵育 4-5 小时后，小心地从含有靶细胞的 96 孔板中移除培养基。向含有靶细胞的 96 孔板的指定孔中加入 50 μL 0.5 百万个细胞/mL 的 T 细胞悬液（25,000 个 T 细胞），从而使 T 细胞的效应细胞与靶细胞比（E:T 比）为 5:1。
